液相色谱仪操作及原理,液相色谱仪的使用步骤？？
今天给各位分享液相色谱仪操作及原理的知识，其中也会对液相色谱仪操作及原理进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注皮肤病网，现在开始吧！
气液相色谱的原理是什么？
高效液相色谱法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。 高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。 高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。 由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。 扩展资料 1、储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数。 2、在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪数据以图谱形式打印出来。 参考资料来源百度百科-气相色谱法
高效液相色谱法的原理是什么？
http:zhidao.baidu.comquestion75086807.html?si=1 一、分离原理 1.气相气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。 2.液相高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 二、应用范围 1.气相气相色谱法具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。 2.液相高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（ 些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。 三、仪器构造 1.气相由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。 2.液相高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。
气相色谱和液相色谱原理和区？
高效液相色谱仪的使用 1.色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管，内径为4～5mm，长100～250mm。按气相色谱法中洗涤空柱的方法洗净，用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中，用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇水(8317)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2～3万ml以上及分离度在1.5以上者，柱效好。为防止柱污染，常用1个 50mm长，4~5mm内径，装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前，以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经，以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚，再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。 2.流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中，经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱，自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution)，即自洗脱开始到结束，溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比，从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离，而整个色谱过程缩短。必须注意，梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。 3.检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收，荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物，大多数药物分子对紫外光有吸收，故能较普遍采用，检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器，既能使流动相停流作组分的定性定量检测，又能提高测定灵敏度，重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源，光强度增加了3~4倍，对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池，在一暄电压下电解产生电流，放大后检测，检测限pg级。 4.数据处理现代高效液相色谱仪带有数据处理系统，除记录谱外，还能自动记录峰的保留时间，能自动积分求算峰面积，并能按照预定的程序作有关计算，报告分析结果。 高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法 1 液相色谱仪系统 液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(如图1所示)。对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件，也是容易出事故的主要场所。 2 常见问题及解决方法 2.1 针对柱压问题(表1) 柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在50PSI之间。压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。值得注意的是在使用梯度洗脱时，进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。 在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。考虑柱子是否被堵，此时可更换一根新柱子进行检测。 2.2 针对保留时间漂移的问题 [2，3] (表2) 保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题，其包括了保留时间增大和减小。它的产生与很多原因有关。 2.3 针对异常色谱峰问题[2-4] 异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。具体情况与原因分析如表3。 3 高效液相色谱仪的保养[5-7] 3.1 HPLC的日常操作条件 工作温度10～30℃; 相对湿度80%; 最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。 3.2 泵的保养 使用流动相尽量要清洁;进液处的沙芯过滤头要经常清洗;流动相交换时要防止沉淀;避免泵内堵塞或有气泡。 3.3 进样器的保养 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染。 3.4 柱的保养 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;当柱子和色谱仪连接时，阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气; 避免使用高粘度的溶剂作为流动相;进样样品要提纯;严格控制进样量;每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭。 3.5 检测器(UV)的保养 紫外灯的保养要在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器;在分析完成后，马上关闭检测器。样品池要保养。 4 在高效液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则一次只改变一个因素，从而确定假定因素与问题之间的联系;如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，从而避免浪费;养成良好的记录习惯，一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。 ，在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养，仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。 建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习！ 分析测试百科网乐意为你解答实验中碰到的各种问题，基本上问题都能得到解答，有问题可去那提问，百度上搜下就有。
液相色谱仪使用步骤
目的制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。 范围适用于Agilent 1260 HPLC。 责任色谱检验工程师负责本规程执行。 内容 1 开机 1.1 打开电脑。 1.2 打开液相色谱各个模块的电源。 1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。 1.4 排气 1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。 1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速5mlmin（一般为3－5mlmin），点击“确定”。 1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速0mlmin，手动旋紧冲洗阀。 1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速1.0mlmin。 1.4.6 同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。 2 编辑方法 2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。 2.2 选中除“数据分析 ”外的三项，进入下一选项卡。 2.3 方法信息在“方法注释”中加入方法的信息（如This is for test!）。进入下一选项卡。 2.4 泵参数设定在“流速”处输入流量, 如1.0mlmin，停止时间如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈水＝7525，A为水，B为乙腈，则设置B75％即可。进入下一选项卡。 2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。 2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如40度。进入下一选项卡。 2.7 UV检测器参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。 2.8 在“ 运行时选项表 ”中，选中“ 数据采集”，点击“确定”。 2.9 从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。 3 单次采集 3.1 从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择 “前缀计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。 3.2 基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。 4 多次数据采集 4.1 按照步骤2 编辑完整方法。 4.2 点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法” 4.3 点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择 “前缀计数器”保存。 4.4 从“序列”菜单，选中“序列另存为…”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。 4.5 从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。 5 数据分析（脱机状态使用） 5.1 双击“仪器 —脱机”图标 进入的脱机画面。 5.2 从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。 5.3 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“ 确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。） 5.4 做谱图优化从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定”。 6 积分: 6.1 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击 ，自动加载积分参数。 6.2 点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。 6.3 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 7 标准曲线 7.1 点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。 7.2 点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。 7.3 至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。 8 打印报告 8.1 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“ 确定”。 8.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告” 底部的“打印”钮。 8.3 点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法） 9 关机 9.1 关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中） 9.2 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。 9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。 10 其它注意事项 10.1 当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。 10.2 系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。 10.3 注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。
液相色谱仪的使用步骤是什么？
目的制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。 范围适用于Agilent 1260 HPLC。 责任色谱检验工程师负责本规程执行。 内容 1 开机 1.1 打开电脑。 1.2 打开液相色谱各个模块的电源。 1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。 1.4 排气 1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。 1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速5mlmin（一般为3－5mlmin），点击“确定”。 1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速0mlmin，手动旋紧冲洗阀。 1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速1.0mlmin。 1.4.6 同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。 2 编辑方法 2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。 2.2 选中除“数据分析 ”外的三项，进入下一选项卡。 2.3 方法信息在“方法注释”中加入方法的信息（如This is for test!）。进入下一选项卡。 2.4 泵参数设定在“流速”处输入流量, 如1.0mlmin，停止时间如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈水＝7525，A为水，B为乙腈，则设置B75％即可。进入下一选项卡。 2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。 2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如40度。进入下一选项卡。 2.7 UV检测器参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。 2.8 在“ 运行时选项表 ”中，选中“ 数据采集”，点击“确定”。 2.9 从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。 3 单次采集 3.1 从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择 “前缀计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。 3.2 基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。 4 多次数据采集 4.1 按照步骤2 编辑完整方法。 4.2 点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法” 4.3 点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择 “前缀计数器”保存。 4.4 从“序列”菜单，选中“序列另存为…”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。 4.5 从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。 5 数据分析（脱机状态使用） 5.1 双击“仪器 —脱机”图标 进入的脱机画面。 5.2 从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。 5.3 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“ 确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。） 5.4 做谱图优化从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定”。 6 积分: 6.1 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击 ，自动加载积分参数。 6.2 点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。 6.3 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。 7 标准曲线 7.1 点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。 7.2 点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。 7.3 至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。 8 打印报告 8.1 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“ 确定”。 8.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告” 底部的“打印”钮。 8.3 点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法） 9 关机 9.1 关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中） 9.2 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。 9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。 10 其它注意事项 10.1 当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。 10.2 系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。 10.3 注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。
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